Как определить группу крови по стандартным сывороткам

Эритроциты выше нормы

Повышение количества эритроцитов в крови (эритроцитоз, полицитемия) в большинстве случаев происходит вследствие сгущения крови в результате дефицита жидкости в организме (чрезмерная потливость, рвота более 4-5 раз в сутки, диарея, повышение температуры тела и т. д.), но также может быть при редких болезнях системы кроветворения.

Увеличение красных кровяных клеток в крови человека иногда происходит из-за физиологических факторов. К ним относятся: сильные умственные перегрузки, стресс. Повышенное содержание эритроцитов в крови часто наблюдается у людей, живущих в горной местности (там недостаточно кислорода), что считается для них нормой. Физиологически повышены эритроциты в крови летчиков, альпинистов, спортсменов. Медицинское вмешательство в этом случае не требуется. Эти показатели приходят в норму, если человек переезжает жить, например, на равнинную местность или меняет тип деятельности. Часто увеличение показателей провоцирует прием некоторых медицинских препаратов (анаболические стероиды, эритропоэтин, антибиотики, препараты железа).

Повышение уровня эритроцитов в крови может возникать в результате проблем с выработкой эритроцитов в костном мозге – первичная полицитемия, а также из-за других факторов или заболеваний, которые способствуют повышению числа эритроцитов в крови – вторичная полицитемия (эритроцитоз). Большинство случаев полицитемии являются вторичными. Первичная полицитемия встречается довольно редко.

Первичная полицитемия возникает вследствие приобретенной или унаследованной генетической мутации, которая вызывает повышенное производство эритроцитов.

Вторичная полицитемия обычно вызвана повышенной циркуляцией гормона эритропоэтина в крови. Причинами вторичной полицитемии обычно являются:

  • хроническая обструктивная болезнь легких
  • легочная гипертензия
  • хронические болезни сердца
  • апноэ во сне
  • плохое кровоснабжение почек
  • некоторые виды опухолей
  • курение

Симптомы повышенного количества эритроцитов довольно обширны. У некоторых людей с полицитемией они могут вообще отсутствовать. При вторичной полицитемии большинство симптомов связаны с основным заболеванием.

Симптомы повышения эритроцитов могут быть расплывчатыми и довольно общими:

  • усталость
  • одышка
  • боль в суставах
  • головная боль
  • зуд кожи, особенно после душа
  • нарушение сна

Эритроциты выше нормы во время беременности

У будущих мам допускается незначительное увеличение «молодых» эритроцитов – ретикулоцитов. Часто такое случается, если беременная женщина проходит курс лечения от анемии. Также вполне объяснимо повышение их содержания после недавнего кровотечения при угрозе самопроизвольного аборта. Ведь организм стремительно пополняет свои запасы, продуцируя новые красные кровяные тельца. Патологией считается ситуация, когда у беременных женщин резко возрастает количество молодых эритроцитов без явных на то причин. Это может свидетельствовать о развитии гемолитической анемии или малярии. У беременных показатель эритроцитов может увеличиваться также при обезвоживании (вследствие расстройства желудка, токсикоза, повышения температуры, повышенного потоотделения).

Эритроциты выше нормы у ребенка

Незначительное отклонение от нормы эритроцитов в детском возрасте не является поводом для беспокойства. Причинами могут быть особенности образа жизни, климат. Например, у младенцев такое явление отмечается при проживании в горных районах. Если ребенок – спортсмен или очень активный, то высокий показатель эритроцитов в анализе также допускается. Это естественная реакция организма на физические нагрузки. Аналогичная ситуация возможна, если дети стали пассивными курильщиками.

Но если в крови у ребенка заметно значительное повышение эритроцитов, то это может свидетельствовать о наличии заболевания. Патологические изменения показателя красной крови у новорожденного могут быть вызваны гипоксией, пороками развития костного мозга, сердечно-сосудистой системы, заболеваниями крови. После года увеличение эритроцитов могут быть следствием заболевания внутренних органов, отравления, обезвоживания, ожирения.

3.2.1. Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

На
основании реакции агглютинации
эритроцитов установлено, что кровь
каждого человека принадлежит к одной
из четырех групп. Кровь различных групп
отличается наличием агглютининов и
агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие
вещества) находятся в плазме. Агглютиногены
– вещества, способные склеиваться,
содержатся в эритроцитах.

Имеются
два вида агглютиногенов – А и В и
соответственно два вида агглютининов
– 
и .
Реакция агглютинации, т. е. склеивание
эритроцитов, наступает лишь при смешении
одноименных агглютининов и агглютиногенов,
например 
и А или 
и В. Агглютинацию нельзя смешивать с
процессом свертывания крови – выпадением
фибрина в виде нерастворимых нитей.

Определение
группы крови имеет практическое значение
для переливания крови. При этом
учитывают, прежде всего, свойства
эритроцитов донора, так как плазма
вводится в малом количестве и, разводясь
в крови реципиента, теряет свои
агглютинирующие качества. Однако при
переливании значительного
количества

крови, учитывают и агглютинины донора.

Для
работы необходимы
:
донорская кровь, стандартные сыворотки
I,
II
и III
групп двух
разных серий
,
предметные стекла (чашка Петри), пипетки,
стеклянные палочки.

Проведение
работы.

Группы крови определяют по свойствам
эритроцитов, которые устанавливают с
помощью стандартных сывороток, содержащих
известные агглютинины.

  1. На
    чистые чашки Петри в обозначенные
    участки наносят по 1 капле сыворотки
    I,
    II
    и III
    групп двух
    серий
    ,
    содержащих соответственно агглютинины:
    I
    – 
    и ,
    II
    – 
    и III
    – .

  2. В
    каждую каплю сыворотки с помощью
    стеклянных палочек или разных углов
    предметных стекол вносят небольшое
    количество донорской крови и тщательно
    размешивают кровь в капле сыворотки
    палочкой до тех пор, пока смесь не примет
    равномерного розового цвета.

  3. Покачивают
    чашку Петри в течение 5 минут. При
    наличии агглютинации капля становится
    прозрачной, а эритроциты склеиваются
    в виде комочков.

  4. По
    мере наступления агглютинации, но не
    раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь
    добавляют по одной капле физиологического
    раствора для предупреждения образования
    «монетных столбиков» из эритроцитов.

  5. Определяют
    наличие агглютинации в каждой капле и
    устанавливают группу крови.

  • Отсутствие
    агглютинации во всех трех каплях
    говорит об отсутствии агглютиногенов
    А и В в эритроцитах исследуемой крови,
    такая кровь принадлежит O(I)
    группе.

  • Если
    агглютинация произошла с сыворотками
    I
    и III
    групп, содержащих соответственно
    агглютинины 
    и ,
    то, следовательно, эритроциты исследуемой
    крови содержат агглютиноген А и эта
    кровь принадлежит А(II)
    группе.

  • Если
    агглютинация произошла с сыворотками
    I
    и II
    групп, содержащих агглютинины 
    и ,
    то эритроциты исследуемой крови
    содержат агглютиноген В и эта кровь
    принадлежит В(III)
    группе.

  • Наличие
    агглютинации в сыворотках всех трех
    групп указывает на присутствие в
    эритроцитах исследуемой крови
    агглютиногенов А и В, следовательно,
    она принадлежит АВ(IV)
    группе. Однако, в этом случае для
    исключения неспецифической агглютинации
    эритроцитов необходимо провести
    дополнительное исследование со
    стандартной сывороткой группы АВ (IV).
    Отсутствие агглютинации в этой капле
    позволит считать реакцию специфической
    и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками
ошибок могут быть
:

  1. Оценка
    реакции отрицательной
    при фактическом
    наличие агглютинации. Это может быть
    обусловлено:

    1. Поздней
      или слабовыраженной агглютинацией в
      связи с малой активностью стандартных
      сывороток;

    2. Нарушением
      соотношения 1:10 при взятии большого
      количества крови;

    3. Наличием
      температуры воздуха большей, чем 25оС.
      В таких случаях исследования проводят
      при охлаждении стекла.

  2. Оценка
    реакции положительной
    при практическом отсутствии агглютинации.
    Это может быть обусловлено:

    1. Образованием
      «монетных столбиков»;

    2. Наличием
      панагглютинации, которая развивается
      при

t=15
оС; для ее
исключения следует повторить определение
при более высокой температуре;

    1. Подсыханием
      сывороток и образованием по краям
      капель «зернистости», принимаемой за
      агглютинацию. Это может быть в тех
      случаях, когда чтение результатов
      производится более чем через 5 минут.

Оформление
протокола.
Записать
принцип метода определения группы
крови, ход работы. Зарисовать полученные
результаты: обозначить номер группы
крови, агглютинины стандартных сывороток
и отсутствие или наличие агглютинации,
например, —

группа
крови

неизвестная
кровь (эритроциты)

агглютинины
сывороток

Вывод.
Назвать и
правильно записать группу крови.
Обосновать полученный результат. Указать
в каких случаях исследуемая кровь может
быть использована в качестве донорской.
Нарисовать схему совместимости групп
крови системы АВО.

Определение группы крови по системе ав0

Определение группы крови – это несложная,
но очень ответственная процедура.
Поэтому врач должен контролировать
правильность проведения исследования
и оценивать его результаты.

Группу крови в системе АВ0 определяют,
исследуя эритроциты индивидуума в
реакциях гемагглютинации с анти-А и
анти-В сыворотками. Результаты этой
реакции обычно подтверждают, выявляя
«нормальные» анти-А- и анти-В-антитела.
В сыворотке, как правило, присутствуют
«нормальные» антитела только к тем
антигенам, которые не экспрессированы
на эритроцитах данного индивидуума.

Прежде чем приступить к исследованию,
необходимо убедиться, что флаконы со
стандартными изогемагглютинирующими
сыворотками правильно расположены в
штативе, прозрачны, не содержат осадка
и срок годности, указанный на их этикетках,
не истек.

Ниже в таблице показаны результаты
реакции с диагностическими препаратами
сывороток и эритроцитов при группах
крови А, В, О и АВ.

Реагент

Фенотип
исследуемого образца

Примечания

А

В

АВ

Сыворотка
анти-А

+

+

Реакцию проводят
с исследуемыми эритроцитами и
стандартной анти-сывороткой (определяют
группу эритроцитов)

Сыворотка
анти-В

+

+

Эритроциты
группы А

+

+

Реакцию проводят
с исследуемой сывороткой и стандартными
эритроцитами (определяют группу
сыворотки)

Эритроциты
группы В

+

+

Эритроциты
группы 0

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Разведение производится так:

  • В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  • Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  • На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  • Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы,
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй,
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III,
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами Группы крови
0(I) A(II) B(III) AB(IV) 0(I) A(II) B(III)
+ + 0(I)
+ + + A(II)
+ + + B(III)
+ + + AB(IV)

+ агглютинация,

– агглютинация отсутствует,

реакцию не проводят.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

Вид цоликлонов Группа крови
Результат агглютинации Анти-А Анти-В
0(I)
+ A(II)
+ B(III)
+ + AB(IV)

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0,
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования,
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов,
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Определение групповой принадлежности крови по системе ав0 перекрёстным методом — стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

ЦЕЛЬ:ознакомиться
с методикой определения групп крови по
системе АВ0 методами стандартных
сывороток и стандартных эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ:стерильные
перчатки, тарелка с нанесенными на ней
обозначениями агглютининов сывороток,
стандартные сыворотки I, II, III групп двух
серий с разным титром антител, стеклянные
палочки, физиологический раствор,
стандартные эритроциты групп А(II) и В
(III).

а)
Метод стандартных сывороток.

ХОД
РАБОТЫ: наносят на тарелку в соответствующие
квадраты (лунки) пипеткой крупные капли
сывороток двух серий I(0), II(A), III(B) групп
(нельзя
допускать смешивания сывороток!)

Концом
чистой стеклянной палочки (или углом
предметного стекла) захватывают небольшое
количество крови и помещают рядом с
каплей сыворотки (капля вносимой крови
должна быть в 10 раз меньше капли
сыворотки), осторожно перемешивают.
Вносят кровь и в две остальные капли
сывороток, используя другие стеклянные
палочки или углы предметного стекла.
Слегка покачивая тарелку в течение 5
мин, наблюдают за каплями. Затем добавляют
каплю физиологического раствора для
исключения ложной агглютинации и
оценивают результат

Агглютинация
выглядит в виде мелких красных крупинок,
постепенно увеличивающихся в размере
на фоне светлеющей сыворотки. На основании
наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации
делают вывод о принадлежности эритроцитов
исследуемой крови к определённой группе
по системе АВО.

б)
Метод стандартных эритроцитов.

ХОД
РАБОТЫ: на тарелку, разделенную на
секторы наносят каплю сыворотки
исследуемой крови, которая в 10 раз меньше
капли стандартных эритроцитов; рядом
поместите каплю стандартных эритроцитов
А(II) и В (III) групп. Действия проводят
разными стеклянными палочками.
Перемешивают капли углом предметного
стекла, тарелочку покачивают в течение
3 минут; затем добавляют по капле
физиологический раствор для исключения
ложной агглютинации, продолжают смешивать
покачиванием и через 5 минут оценивают
результат. На основании наличия (+) или
отсутствия (-) агглютинации делают вывод
о принадлежности сыворотки исследуемой
крови к определённой группе по системе
АВО.

Оценка
результатов.

Группы
крови

стандартные
сыворотки

(их
антитела взаимодействуют с антигенами
на мембранах эритроцитов исследуемой
крови)

Стандартные
эритроциты
(их
антигены взаимодействуют с антителами
сыворотки исследуемой крови)

I
ab

II
b

III
a

А(II)

В
(III)

0(I)
ab

+

+

A(II)b

+

+

+

B(III)a

+

+

+

АВ
(
IV)

+

+

+

Изосерологических исследованиях

Стандартные эритроциты,
содержащие определенные сочетания
аллоантигенов, предназначены для
выявления антиэритроцитарных антител
в сыворотке исследуемой крови, при
определении групп крови АВО перекрестным
способом, при определении резус-принадлежности
крови, а также для проведения контроля
специфичности и активности стандартных
изогемагглютинирующих сывороток АВО,
сывороток антирезус; тест-сывороток и
реактивов, предназначенных для определения
антигенов различных систем эритроцитов
крови человека. Стандартные эритроциты
группы О(I) должны содержать в эритроцитах
клинически значимые антигены: D, C, Cw, c,
E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le.

С целью увеличения
срока годности стандартных эритроцитов
можно производить их консервирование
специально изготовленными консервирующими
растворами.

Особенности исследуемой крови

Развитие неспецифической панагглютинации
может быть связано не только с низкой
температурой, но и с качествами самой
крови.

Панагглютинацию при бактериальном
заражении исследуемой крови в 1927 г.
описал Томсен. Этот феномен (феномен
Томсена) характеризуется агглютинацией
крови с сыворотками всех групп и
сывороткой собственной крови.

Сущность явления заключается в том, что
сыворотка при комнатной температуре
даёт агглютинацию со всеми эритроцитами,
даже со своими собственными
(аутоагглютинация), а эритроциты в то
же время дают агглютинацию со всеми
сыворотками, даже с сыворотками группы
AB(IV).

Подобное явление описано при различных
заболеваниях: болезнях крови, спленомегалии,
циррозе печени, инфекционных заболеваниях
и т.д. Панагглютинацию крайне редко
наблюдают и у здоровых людей. Панагглютинацию
и аутоагглютинацию выявляют только при
комнатной температуре; при температуре,
близкой к температуре человеческого
тела, этих явлений не происходит.

Во избежание ошибок необходимо не
допускать определения группы крови при
температуре ниже 15 ?С. Если при определении
групповой принадлежности агглютинация
происходит с сыворотками групп 0(I), A(II)
и B(III) всегда следует проводить реакцию
с сывороткой группы AB(IV). Только в том
случае, если в этой капле не будет
агглютинации, можно исключить
панагглютинацию и отнести кровь к группе
AB(IV). При наличии агглютинации с
сывороткой AB(IV) необходимо подогреть
кровь до 37 ?С и провести реакцию при этой
температуре, при этом панагглютинация
и аутоагглютинация исчезают.

При некоторых заболеваниях отмечают
снижение агглютинабельности агглютиногенов
эритроцитов (хронические инфекционные
заболевания, онкологические заболевания,
болезни крови и др.). При этом так же, как
и при наличии слабого антигена A2,
следует чётко соблюдать условия и время
реакции.

Во всех случаях нечёткого или
сомнительного результата необходимо
повторное определение группы крови при
помощи стандартных сывороток других
серий, а также перекрёстным способом.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

  • по изогемагглютиновым сывороткам;
  • по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
  • метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах 15-25 °C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с капельками сыворотки (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных  из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам

Стандартные эритроциты
для исследований по системе АВО должны
давать четкую, хорошо видимую агглютинацию
при взаимодействии со стандартными
сыворотками соответствующей специфичности
и не давать агглютинации с сыворотками,
не содержащими антител против данного
антигена эритроцитов.

Стандартные эритроциты
группы А(II), предназначенные для выявления
агглютинина анти-А, должны иметь титр
не ниже 1:64, эритроциты группы В(III),
предназначенные для выявления агглютинина
анти-В, также должны иметь титр не ниже
1:64.

Титр антигенов А и В
устанавливается с помощью стандартных
изогемагглютинирующих сывороток группы
Абета(II) (анти-В) и Вальфа(III) (анти-А) или
соответствующих моноклональных антител,
удовлетворяющих требованиям действующих
инструкций.

Время наступления
агглютинации эритроцитов А1 и В со
стандартными изогемагглютинирующими
реактивами должно составлять не более
десяти секунд; эритроцитов подгруппы
А3, В2 — не более двух минут.

Стандартные эритроциты
группы крови О(I) не должны давать
агглютинации со стандартными сыворотками
групп крови Оальфа бета(I), Абета(II),
Вальфа(III) в течение двадцати минут.

Стандартные
резус-положительные эритроциты группы
крови О(I), содержащие антиген D, а также
антигены С, Cw, c и E, e в различных сочетаниях,
предназначенные для выявления антител
системы резус, должны давать соответственно
со стандартными сыворотками анти-D,
анти-C, анти-Cw, анти-c, анти-E и анти-e четкую
агглютинацию при определении методом
конглютинации с желатином, экспресс-методом
в пробирках или на плоскости без подогрева
или непрямой пробе Кумбса в зависимости
от того, для какого метода исследования
предназначена данная стандартная
сыворотка антирезус.

Стандартные
резус-отрицательные эритроциты О(I)
фенотипа ccddee не должны давать агглютинации
с реактивами антирезус, содержащими
антитела анти-D, анти-С, анти-Е во всех
методах исследования, для использования
в которых предназначены указанные
реактивы антирезус.

Время наблюдения за
отрицательной реакцией должно
соответствовать времени, установленному
для каждой из этих реакций.

Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками (прямой способ).

На этикетке должны быть указаны:

название учреждения, где изготовлена сыворотка;

  • групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов;

  • номер серии;

  • титр агглютининов в сыворотке;

  • срок годности;

Для проведения реакции пригодны сыворотки с титром агглютининов не ниже 1:32.

Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре +2-4ºС. Допускается замораживание сыворотки — ее можно использовать после оттаивания. Перед применением необходимо убедиться, что в сыворотке нет хлопьев и осадка, она сохранила соответствующий группе цвет. Перед постановкой реакции сыворотка должна согреться до комнатной температуры (+15-25ºС) в течение 30-40 мин. Тарелка или пластинка, на которой ставится реакция, также должна иметь комнатную температуру.

Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток

Оснащение:

  1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III) двух серий и сыворотка группы АВо(IV) одной серии.

  2. Изотонический раствор хлорида натрия.

  3. Белые фарфоровые или любые другие пластинки (тарелки) со смачиваемой поверхностью, разделенные на четыре сектора, обозначенные соответственно группам крови.

  4. Маркированные для каждой группы крови и серии сывороток пипетки.

  5. Стеклянные или пластмассовые палочки с округлыми концами для перемешивания крови.

Техника выполнения:

На краю пластинки (тарелки) пишут фамилию и инициалы пациента.

Под соответствующими обозначениями на пластинку (тарелку) наносят по капле (приблизительно 0,1 мл) сывороток групп Оαβ(I), Аβ (II), Вα (III) двух серий. Сыворотку берут из каждого флакона отдельной пипеткой, которая затем остается во флаконе.

Кровь для исследования берут из места укола мякоти концевой фаланги пальца. Можно также использовать цельную венозную кровь или взвесь эритроцитов после сворачивания или центрифугирования крови с Htне менее 30%. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят стеклянной палочкой на пластинку (тарелку) рядом с каплей стандартной сыворотки. Таким образом, соотношение крови и сыворотки получается 1:10.

Стеклянной палочкой перемешивают капли крови и сыворотки до равномерного окрашивания смеси в розовый цвет

Необходимо или каждый раз использовать новую палочку, или после каждого перемешивания промывать палочку в стакане с физиологическим раствором и насухо вытирать чистой марлей или ватой.

После перемешивания пластинку осторожно покачивают в руках до истечения времени постановки реакции. Этим предотвращается неспецифическая агглютинация эритроцитов («ложная агглютинация»).

Результат реакции оценивают через 5 мин

В случае наступления агглютинации с сыворотками всех групп ставится аналогичная реакция с сывороткой четвертой группы, одной серии. Заключение о принадлежности крови к IVгруппе делается при отсутствии агглютинации с сывороткойIVгруппы. При сомнительных результатах реакции по истечении 5 минут в капли, где произошла агглютинация можно добавить по 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и слегка покачать пластинку. «Ложная агглютинация» при этом исчезнет.

Трактовка результатов реакции

Реакция гемагглютинации может быть положительной и отрицательной. При положительной реакции образуются агглютинанты, имеющие вид крупинок или хлопьев, а капля изогемагглютинирующей сыворотки почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции сыворотка продолжает оставаться окрашенной в розовый цвет и в ней не обнаруживается агглютинантов. Результаты реакций с сывороткой одной и той же группы разных серий должны совпадать.

Необходимо указать, что в соответствии с новой «Инструкцией по применению компонентов крови» (2002) в отличие от Инструкции 1998 г в технику прямого способа определения групп крови внесены следующие изменения:

  • Соотношение крови и сыворотки – 1:10. Ранее – 1:5 – 1:7.

  • Добавление физиологического раствора производится только по истечении 5 минут, то есть по истечении срока проведения реакции. Ранее изотонический раствор хлорида натрия добавлялся по мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин. от начала реакции.

Прямой способ определения группы крови даже при технически безупречном выполнении предполагает хотя и очень небольшую (доли процента), но достоверную вероятность ошибки. Основными причинами возможных ошибок являются наличие подгрупп и «кровяные химеры». Для ликвидации возможных ошибок результат прямой реакции перепроверяется перекрестным способом.

StudFiles.ru

Оцените статью
Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Андрей Измаилов
Наш эксперт
Написано статей
116
Добавить комментарий